离子色谱法测定蜂花粉与蜂王浆中的葡萄糖 果糖 蔗糖和麦芽糖薛晓锋....

邓伟恒 吴国辉 王柳玲 吴俊发

蜂蜜富含多种营养物质，风味独特，有较高的营养价值。我国是蜜生产、消费和出口大国。蜂蜜种类繁多，成分复杂，很容易造假掺假。其中一种蜂蜜的掺假方式，就是以麦芽糖为掺假物加入到蜂蜜中。

目前，检测蜂蜜中糖的含量主要采用国标GB 5009.8- 2016《食品安全国家标准 食品中果糖、葡萄糖、蔗糖、麦芽糖、乳糖的测定》第一法高效液相色谱法进行检测，采用示差折光检测器，外标法进行定量。当利用此法对一个含有多种二糖成分的蜂蜜作麦芽糖检测时，其麦芽糖色谱峰会与其他二糖色谱峰相连或重叠，对实际麦芽糖含量的检测准确度造成了影响。另外，也有文献提出利用高效液相色谱仪连接荧光检测器对蜂蜜的还原糖作检测。通过衍生化使还原糖获得荧光基团从而通过荧光检测器检测。该方法的优点是灵敏度高、选择性高等优点。但是同时也有衍生化等的操作，较为繁琐，不利于检验机构大批量检测。

近红外反射光谱是一种快速无损检测方法，通过仪器对样品进行检测，获得光谱数据，对数据进行一系列的处理计算比对从而判定蜂蜜是否有添加麦芽糖掺假。此方法实验前需对光谱进行处理，建立稳定可靠的模型，但同时也不能准确定量，不同源的蜂蜜需各自完成定量校正分析。方法并不完善。

此外，蜂蜜的糖类检测还有气质联用法、高效毛细管电泳法、核磁共振法等。但这些方法都有仪器昂贵，操作复杂繁琐的缺点，同样不适宜实验室大批量检测。

采用离子色谱法对蜂蜜中的糖类进行检测。解决部分含多种二糖的蜂蜜样品在使用国标高效液相色谱法检测麦芽糖时可能出现的麦芽糖峰与其他非目标峰分离度不足的问题，准确测定麦芽糖的含量。该方法简单快捷，无需衍生，各种糖目标峰分离清晰，灵敏度高，结果稳定。

实验部分

液相色谱法。

麦芽糖标准峰出现在9.2分钟处。在样品图中，麦芽糖峰附近，都有非目标峰的出现，对麦芽糖的定量造成一定干扰。而示差检测器基于本身工作原理，无法对目标峰进行定性，所以会对测定麦芽糖的结果带来一定的影响。

离子色谱法。

（1）仪器与试剂

离子色谱仪（戴安Dionex ICS- 5000）配备脉冲安培检测器；

Milli- Q去离子水发生器（美国Millipore公司）

麦芽糖标准品来（Dr. E hrenstorfer GmbH）

淋洗液乙酸钠和氢氧化钠（戴安）

蜂蜜样品来自于市场购买。

（2）样品处理

称取蜂蜜样品1g于250mL容量瓶中，加入50mL去离子水，溶解均匀，加水定容。过0.22μm水相滤膜后使用离子色谱仪分析。

（3）离子色谱条件

色谱柱：Carbodac PA1柱（4 mm × 250 mm ）；

柱温：30 ℃；进样体积：10 μL；流速：1.2 mL/min；

参考电极：pH/AgCl（AgCl mode）

淋洗液：A为H2O，B为 氢氧化钠溶液（150mmol/L），C为乙酸钠（500mmol/L）氢氧化钠（150mmol/L）混合溶液；

方法学考察

标准曲线。用去离子水配制麦芽糖标准工作溶液。以分析物的峰面积（y）和对应的质量浓度（x，mg/L）进行线性回归计算，得到线性方程和相关系数（见表2）。线性范围5.0～ 100 mg/L之间。麦芽糖在线性范围内，有良好的线性关系（相关系数R大于0.999）。

检出限与定量限。根据仪器的检出限（LOD，S/N= 3）及定量限（LOQ，S/ N=10），结合样品的前處理过程，计算得到麦芽糖的检出限在 g/100g，定量限为g/100g（见表2），表明方法具有较高的灵敏度。

加标回收率和精密度。为验证方法的准确度，按本实验方法对样品进行了0.5 g/100g、1.0 g/100g和2.0 g/100g三个水平的加标回收实验（n=6）。实验结果见表3，麦芽糖的回收率在95.3% ～ 101%，相对标准偏差（RSD，n=6）3.6%，方法显示了良好的准确性和重现性。（表3）

实际样品分析。本次选取5个麦芽糖阳性样品，通过同时用离子色谱法和国标方法（液相色谱法）完成麦芽糖含量的测定，作出比较。（表4）

离子色谱法提供了一个方便快捷的检测蜂蜜中麦芽糖的方法，解决了液相色谱法可能带来的测定影响，更能准确测定蜂蜜中麦芽糖的含量，同时也能对蜂蜜主要成分果糖和葡萄糖进行定量检测，适合商品检测实验室用来作为一个辅助方法对部分使用国标检测方法不能准确检测麦芽糖含量蜂蜜样品进行检验，得出数据作为参考。